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            ELISA 實驗標本采集、處理和保存

            發布時間:2019-07-03      點擊次數:1915

            一、ELISA 實驗中血清的采集、處理和保存

            1、 真空采血針采集 2 ml 新鮮血液,加入無菌試管中。
            2、 采血后室溫靜置 1 小時。
            3、 將采集血液用離心機 4℃,2500rpm 離心 10 min,,將離心好的勻漿留上清,棄下面沉淀。 4、 取上清。 分裝凍存備用, 2-8℃ 下,可放置保存 24-48 小時; -20℃ 下,可放置保存 1 個月; -70℃ 下,可放置保存 6 個月。5、 根據你的實驗需要,取適量上清夜進行各種 ELISA 測定。 大部分 ELISA 檢測均以血清為標本。血清標本可按常規方法采集,應注意避免溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質,以 HRP 為標記的 ELISA 測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色。此外還應避免細菌污染,因為菌體中可能含有含有內源性過氧化物酶,也會產生假陽性反應。血清標本宜在新鮮 時檢測。如在冰箱中保存過久,其中的可發生聚合,在間接法 ELISA 中可使本底加深。

            二、ELISA 實驗中血漿的采集、處理和保存

            1、 真空采血針采集 2 ml 新鮮血液,加入無菌試管中。
            2、 按 1:9 加入抗凝劑(EDTA、草酸鈉、肝素、枸櫞酸鈉),30 分鐘內于冰上分離血漿以 減少血小板的污染;(也可以直接用抗凝管采集)。
            3、 將采集血液用離心機 4℃,2500rpm 離心 5 min,將離心好的勻漿留上清,棄下面沉淀。
            4、 取上清.分裝凍存備用, 2-8℃ 下,可放置保存 24-48 小時; -20℃ 下,可放置保存 1 個月; -70℃ 下,可放置保存 6 個月。
            5、 根據你的實驗需要,取適量上清夜進行各種 ELISA 測定。 請注意指標說明書上對于抗 凝血劑是否有特殊要求,建議使用 EDTA。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,其他成份均同等于血清。 注意事項:制備血漿標本需借助于抗凝劑 EDTA, 抗凝不完全的標本因纖維蛋白原干擾而造成假陽性。

            三、ELISA 實驗中尿液的采集、處理和保存

            1、 采集尿液樣本 500ul,加入無菌試管中。
            2、 將采集血液用離心機 4℃,2500rpm 離心 10 min,將離心好的樣本留上清,棄下面沉淀。

            3、取上清。 分裝凍存備用, 2-8℃ 下,可放置保存 24-48 小時; -20℃ 下,可放置保存 1 個月; -70℃ 下,可放置保存 6 個月。

            4、 根據你的實驗需要,取適量上清夜進行各種 ELISA 測定。

            四、ELISA 實驗中腦脊液的采集、處理和保存

            1、采集腦脊液樣本,加入無菌試管中
            2、將采集血液用離心機 4℃,2500rpm 離心 10 min,,將離心好的樣本留上清,棄下面沉淀。 3、取上清。 分裝凍存備用, 2-8℃ 下,可放置保存 24-48 小時; -20℃ 下,可放置保存 1 個月; -70℃ 下,可放置保存 6 個月
            4、根據你的實驗需要,取適量上清夜進行各種 ELISA 測定。

            五、ELISA 實驗中細胞上清液的采集、處理和保存

            1、采集細胞培養上清液 500ul,加入無菌試管中。
            2、將采集血液用離心機 4℃,2500rpm 離心 10 min,將離心好的勻漿留上清,棄下面沉淀。 3、取上清。 分裝凍存備用, 2-8℃ 下,可放置保存 24-48 小時; -20℃ 下,可放置保存 1 個月; -70℃ 下,可放置保存 6 個月。
            4、根據你的實驗需要,取適量上清夜進行各種 ELISA 測定。

            六、ELISA 實驗中細胞裂解液的采集、處理和保存(需要測蛋白濃度)

            1、 取細胞培養板或細胞懸液,用 PBS(PH7.2-7.4)洗滌細胞培養板 1-2 次。
            2、 通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑(裂解液),使細胞破壞并放出細胞內成份。
            3、 將采集血液用離心機 4℃,2500rpm 離心 20 min,,將離心好的勻漿留上清,棄下面沉 淀。 4、取上清。 分裝凍存備用, 2-8℃ 下,可放置保存 24-48 小時; -20℃ 下,可放置保存 1 個月; -70℃ 下,可放置保存 6 個月5、 根據你的實驗需要,取適量上清夜進行各種 ELISA 測定。

            七、ELISA 實驗中肺泡灌洗液的采集、處理和保存

            1、 10% 水合氯醛溶液,腹腔麻醉。
            2、 打開腹腔,另取 10 ml 注射器行下腔靜脈采血,盡可能將血放盡。
            3、 在冰面上對左肺進行肺灌洗。取 37℃ 生理鹽水 5 ml,分三次灌洗:2 ml、1.5 ml、1.5 ml 灌洗?;厥章试?70% 以上。
            4、 將肺泡灌洗液用離心機 4℃,1500rpm 離心 10 min。
            5、 取上清。 分裝凍存備用, 2-8℃ 下,可放置保存 24-48 小時; -20℃ 下,可放置保存 1 個月; -70℃ 下,可放置保存 6 個月。
            6、 根據你的實驗需要,取適量上清夜進行各種 ELISA 測定。

            八、ELISA 實驗中關節滑液的采集、處理和保存

            1、 口腔關節:患者取坐位,常規消毒后,作皮下及關節后區局部浸潤麻醉。然后囑患者大 張口,采用裝有 2 ml 生理鹽水的注射器(5 號針頭)作關節上腔 穿刺,髁后進針,針尖方向斜向前、內、上,抵達關節結節后斜面后稍后退,回抽如發現有淡黃色液體,即表明已進入關節上腔,注入 2 ml 生理鹽水,反復注入、 回抽五次。 膝骨關節滑液:無菌穿刺取得關節液。
            2、 將關節液用離心機 4℃,1500rpm 離心 15 min,將離心好的勻漿留上清,棄下面沉淀
            3、 取上清。 分裝凍存備用, 2-8℃ 下,可放置保存 24-48 小時; -20℃ 下,可放置保存 1 個月; -70℃ 下,可放置保存 6 個月。
            4、 根據你的實驗需要,取適量上清夜進行各種 ELISA 測定。

            九、 ELISA 實驗中各類組織勻漿的采集、處理和保存(需要測蛋白 濃度)

            1、 采集組織,在冰冷的生理鹽水中漂洗,除去血液,濾紙拭干,稱重,剔除附屬的結締組 織,稱取組織塊。
            2、 用移液管量取 0.1M PBS 或者用 0.86% 冷生理鹽水,勻漿介質或生理鹽水的體積總量應 該是組織塊重量的 9 倍,用眼科小剪盡快剪碎組織塊(天然時操作要在冰水浴中進行,將盛有組織 的小燒杯放入冰水中)。
            3、 勻漿的方式有多種: a) 手工勻漿:將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中,再將剩余的 1/3 勻漿介質或生理鹽水 沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊,一起倒入勻漿管中進行勻漿,左手持勻漿管將下 端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手將搗桿垂直插入套管中,上下轉動研磨數十次(6~8 分鐘),充分研碎,使組織勻漿化。 b) 機器勻漿:用組織搗碎機 10000~15000r/min 上下研磨制成 10% 組織勻漿,也可用 內切式組織勻漿機制備(勻漿時間 10 秒/次,間隙 30 秒,連續 3~5 次,在冰水中進行),皮膚、肌肉組織等可延長勻漿時間。
            4、 將制備好的 10% 勻漿用離心機 4℃,3000rpm 離心 15 min,將離心好的勻漿留上清,棄 下面沉淀。
            5、 取上清。 分裝凍存備用, 2-8℃ 下,可放置保存 24-48 小時; -20℃ 下,可放置保存 1 個月; -70℃ 下,可放置保存 6 個月。
            6、 根據你的實驗需要,取適量上清夜進行各種 ELISA 測定。 

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