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            ELISA試劑盒常見問題處理

            發布時間:2019-05-30      點擊次數:1536

            出現問題

            出現問題的原因

            解決辦法

            曲線
             
             
             
             
             
             
             
             
             
             
             
             
             
             
             
             
             

             
             
             
             
            OD值不正常
             
             
             
             
             
             
             

            試劑盒未回溫

            試劑盒回溫到25℃

             

             

            溫度控制不好

            控制正確溫度

             

             

            孵育時間不準確

            控制孵育時間

             

             

            洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數增加

            洗滌4-5次,每孔250ul,然后拍干

             

             

            陽光直射,對著風直接吹

            避風避光

             

             

            酶標儀的波長錯誤

            酶標儀的波長450nm

             

             

            抗體的稀釋錯誤

            正確的稀釋抗體

             

             

            水質問題

            礦泉水代替

             

             
            白   板
             
             

            洗滌液配制錯誤

            正確的配制洗滌液

             

             

            少加液體(抗體、酶標記物、A液、B液)

            正確的步驟加液體

             

             

            錯加液體

             

             

             
            無 梯 度
             
             

            標準品也污染

            換標準品點板

             

             

            OD值不正常

            控制溫度時間在做一次

             

             

            人為點板

            /

             

            線 性 不 好
             

            OD值不正常

            控制溫度時間在做一次

             

             

            人為點板

            /

            回  收  率
             
             
             
             
             
             

             
            空白管陽性高
             
             

            樣本本身就是陽性樣本

            換陰性樣本做回收率

             

             

            空白管在實驗中被污染

            實驗中防止交叉污染

             

             

            水質原因

            用娃哈哈礦泉水代替

             

             
             
            偏  高
             
             
             
             

            添加量不準確

            的添加量

             

             

            添加濃度不適合

            添加合適的濃度

             

             

            取液吹干量多

            準確的取液吹干

             

             

            取到其它相層液體

            取需用相吹干

             

             

            復溶液未稀釋或加入量少

            正確的稀釋復溶液

             

             
            偏  低
             
             
             

            添加量不準確

            的添加量

             

             

            添加濃度不適合

            添加合適的濃度

             

             

            取液吹干量少

            準確的取液吹干

             

             

            復溶液稀釋錯誤或加入量多

            正確的稀釋復溶液

             
             
            假陰、陽性
             
             
             
             
             

            水質原因

            點復溶液驗證

            用娃哈哈礦泉水代替

             

            實驗操作原因
             
             
             

            吸取到其它相吹干

            準確的取液吹干

             

             

            離心不徹底

            延長離心時間

             

             

            樣本的污染

            更換樣本

             

             

            乳化未處理完全

            溫?。?0℃)處理乳化現象

             

            儀器試劑原因
             

            離心管未清洗干凈

            正確的洗滌器具

             

             

            有機溶劑的影響

            做試劑空白看影響結果

             

            衍生化試劑原因(長時間衍生化試劑變質)

            更換衍生化試劑

             

            與曲線好壞相關

            保證曲線的正常

             
             
            金標檢測(T)線顏色較淺
             
             

            尿液pH偏堿性

            用0.01M HCl調節尿液pH值到7.0左右。

             

            尿樣滴加過多

            重新測定,尿樣按照說明書,控制在2滴

             

            尿液過于混濁

            將尿液離心后,取上清液重新測定

             
             
            金標質控(C)線不出現
             
             
             
             
             
             

            檢測卡由于高溫、受潮等原因失效

            尿樣需要重新檢測。

             

            過了有效期失效。

            該批號的金標應丟棄處理,尿液需要重新檢測
             

             

            操作過程中檢測卡沒有平放,導致液體樣品直接沖過檢測區

            尿樣需要重新檢測,且檢測卡平放于桌面上再加樣。

             

            尿液樣品中含有較高的抑制或者干擾抗原抗體反應的物質(比如明礬、小蘇打、氧化劑、肌酐等)

            該尿液的檢測結果無效

            金標卡上在除了T和C線之外的其他地方出線

            金標卡上的劃痕;膠體金在跑板過程中沒有完全跑干凈而在卡上的痕跡;

            該檢測卡結果不可信,尿液需要重新檢測。

            實驗重復性不好

            操作人員的不一致,取樣的不一致,樣本數量的多少,加樣時間的長短,洗滌條件不一致,加樣量不一致

            盡量保持的實驗一致性
             

            分析軟件的使用
             

            不能設置和保存

            正確的設置和保存

             

            如何判斷曲線的好壞和分析結果

            正確的判斷曲線的好壞和分析結果

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